|
Solución de problemas con ensayos de inmunofluorescencia |
|
|
Problema: El control positivo es negativo o muy débil.
Causas posibles: |
|
| 1. | Observe que los controles disponibles en Fuller Laboratories se envasan en frascos como "dilución para detección". Esta dilución depende del ensayo específico, pero en todos los casos el objetivo inicial de todos los controles positivos es su uso sin dilución para demostrar una reacción "fuerte". Estos controles presentan valoraciones de los criterios de valoración 8 veces mayores a la dilución para detección (intervalo de 1:4 a 1:16). |
| 2. | Si las extensiones de sustrato de IFA se adquieren como componentes, los controles positivos y negativos disponibles en Fuller Laboratories pueden usarse para hallar la valoración de uso del conjugado óptima. Esta valoración óptima debe otorgar una reacción claramente positiva de 1+ con una dilución de control positivo de 1:8 (ver el punto 1 anterior) y una reacción claramente negativa con el control negativo sin diluir. |
| 3. |
El microscopio debe estar equipado con un sistema de filtros para AlexaFluor 488 (longitud de onda de excitación máxima de 493 nm, longitud de onda de emisión media de 518 nm) y un aumento de 400X. |
Preguntas/problemas
- El control positivo es negativo o muy débil.
- Células del sustrato o antígeno cubiertos o ausentes en los pocillos antes de la prueba.
- Células del sustrato o antígeno lavados durante el procedimiento.
- El control negativo es positivo.
- Las reacciones son más fuertes en los bordes del pocillo en comparación con el centro.
